做荧光定量PCR,前期提取RNA的时候一定要加入DNase I和RNase inhibitor吗?我这次提取的RNA,OD260/280是1.88,跑出的条带还行.现在应经反转录为cDNA了,不知道做后期的荧光定量PCR有影响没?

来源：学生作业帮助网 编辑：作业帮 时间：2024/04/25 22:54:51
做荧光定量PCR,前期提取RNA的时候一定要加入DNase I和RNase inhibitor吗?我这次提取的RNA,OD260/280是1.88,跑出的条带还行.现在应经反转录为cDNA了,不知道做后期的荧光定量PCR有影响没?

做荧光定量PCR,前期提取RNA的时候一定要加入DNase I和RNase inhibitor吗?我这次提取的RNA,OD260/280是1.88,跑出的条带还行.现在应经反转录为cDNA了,不知道做后期的荧光定量PCR有影响没?
做荧光定量PCR,前期提取RNA的时候一定要加入DNase I和RNase inhibitor吗?我这次提取的RNA,OD260/280是1.88,跑出的条带还行.现在应经反转录为cDNA了,不知道做后期的荧光定量PCR有影响没?

做荧光定量PCR,前期提取RNA的时候一定要加入DNase I和RNase inhibitor吗?我这次提取的RNA,OD260/280是1.88,跑出的条带还行.现在应经反转录为cDNA了,不知道做后期的荧光定量PCR有影响没?
1.其实反转录要求不是很高,所有器具消毒操作带手套口罩就行,没必要加RNaseInhibitor
2.OD260/280实际上反应的是蛋白质杂质的比例,可以间接的反应有没有RNA酶污染,所以这个比值低了有可能是RNA酶污染,也可能是提取操作或者试剂问题导致蛋白质残留过多.
做普通跑胶比值要求高一些在1.80-2.20之间；如果做实时定量要求就会低很多,1.5我都做过,影响不是很大,总量少不怕,就怕有差异,关键是点样不容易均一,因为实时定量非常敏感,很小的差异都会放大N倍,一般就靠增大总反应体积来减少误差,30-50微升的时候由操作带来的误差会大大减少,而很多人用的10微升体系做10次能有2次正常结果就不错了.

反转录的DNA是不含内含子的，如果你设计的引物扩增的片段是夸内含子的，就没关系！

1.88，数值偏低了。。cDNA转录前，一定要做DNase处理的。。
你可以检测一下你的样品中有没有DNA污染。。

268/280为1.88，很可能混有DNA。
如果是mRNA的pcr可以通过很多方法降低非特异性，如oligodt作反转录引物、PCR引物用夸内含子的，并通过软件优化等等。但仍有可能有非特异性的产物，你可以先试pcr一次看看。
建议最好还是用DNase I处理，因为即使得到的数据较好，别人质疑你的结果受到DNA非特异的干扰，你是很难证明没有干扰的。
如果你操作熟练、迅速，...

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268/280为1.88，很可能混有DNA。
如果是mRNA的pcr可以通过很多方法降低非特异性，如oligodt作反转录引物、PCR引物用夸内含子的，并通过软件优化等等。但仍有可能有非特异性的产物，你可以先试pcr一次看看。
建议最好还是用DNase I处理，因为即使得到的数据较好，别人质疑你的结果受到DNA非特异的干扰，你是很难证明没有干扰的。
如果你操作熟练、迅速，并不定时检测完整度，inhibitor倒是可以省略

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做荧光定量PCR,前期提取RNA的时候一定要加入DNase I和RNase inhibitor吗?我这次提取的RNA,OD260/280是1.88,跑出的条带还行.现在应经反转录为cDNA了,不知道做后期的荧光定量PCR有影响没? 我只做过RNA提取,cDNA合成,荧光定量pcr,能从事什么工作? 做荧光定量PCR前要做总RNA定量吗 反转录PCR和荧光定量PCR很纠结的问题.我想做一个基因的表达量定量.之前认为是先提取RNA,然后反转录,然后做荧光定量.现在发现貌似反转录PCR也是可以做定量的,请问是不是这样?这两个怎么都 人外周血的RNA含量一般是什么范围?我用来做荧光定量PCR的, 进行荧光定量pcr实验时,对提取RNA质量要求多高? 肿瘤细胞RNA提取不出来?我是想提取RNA,然后在反转录,最后做荧光定量PCR.我用的标本是Hep-2喉癌细胞株,试剂盒是Biomiga_EZgeneTM Biozol RNA kit,每次收集50ml培养瓶里面的细胞,但是总是提取不出来RNA, DNA RNA做PCR问题请问DNA做PCR的要求怎么样,比如DNA多长能做多长不能做,越长越好还是越短越好’反之RNA做RT-PCR也一样吗?另外DNA直接做PCR,而RNA则分反转录PCR和荧光定量PCR对吗?荧光定量是只用来 northern blot 和荧光定量PCR区别我想研究非编码RNA,文献中好多都做northern blot,请问northern blot 和荧光定量PCR的区别?两者都是从转录水平检测RNA的表达啊, 去拿报告单的时候医生不在 这个报告单不懂得看 丙型肝炎病毒（HCV-RNA）定量 实时荧光定量PCR 实时定量PCR试剂盒选那种好?还有、rna提取的试剂盒,反转录试剂盒……做鱼的 做荧光定量PCR和半定量PCR有什么区别?半定量的PCR退火温度和荧光定量PCR是一样的吗? 荧光定量PCR和实时荧光定量PCR的区别? 有没有植物组织RNA提取试剂盒,提取出的RNA是直接消化过的?或者有提取效率比较高的、快速的，效果好的植物总RNA提取试剂盒，我做荧光定量用的 在荧光定量PCR,RNA提取中,15到30℃孵育2到3分钟是什么意思? 实时荧光定量PCR 的引物能不能用来做RT 兰花根和厡球茎RNA提取做DNase处理反转录后,pcr总是没产物?植物材料兰花根和厡球茎,RNA提取后测浓度和纯度都挺好,做DNase处理后反转录cDNA,之后做PCR,一直都没有产物,荧光定量没结果半定量也 荧光定量PCR哪个公司做的好?阅微基因在荧光定量PCR做的效果如何?