PCR中 两个引物的Tm值相差太大有什么害处?

PCR中 两个引物的Tm值相差太大有什么害处? 如果从primer5中得到引物的tm 值怎么确定pcr温度 PCR中Tm值的疑问我有一段引物，比如NNNNNN，然后我在这段引物前面加了标记，所以是XXXXXNNNNN，那么它的Tm值会有变化么？ 引物的Tm值是什么 请教如何计算出兼并引物的退火温度我是一个新手,如何根据公司送来的兼并引物的单子上的Tm值推出实际PCR时的退火温度呢?引物单子上有两个Tm值,分别是1M 钠离子,50mM钠离子条件下的Tm值.实 关于退火温度与引物Tm~我用PP5做的引物发现引物Tm值比退火温度低 这很奇怪啊,做PCR是不是退火温度一定要比Tm高呢? 为什么pcr 引物设计出来,下游引物加上酶切位点和保护碱基后,有一个Tm值是负值呀?还有,好多的Tm值都代表什么呢?引物Tm60多,二级结构的Tm达到40度有关系吗?G值有什么用 pcr中引物的作用 为什么做PCR设定引物退火温度时设定的退火温度要比合成引物得到的引物Tm值低几度? PCR反应温度怎么设置?由于刚刚开始做实验,什么都不懂,PCR引物的Tm值一条为50.6一条为54.3目标片段为195bp请问PCR反应程序该怎么设计啊? 我在做PCR时,有好多的引物,Tm值在40-62之间,不知道用什么温度比较好. 试举两个进行PCR引物设计的生物信息学程序,并选用其中的任何一个对GenBank登录号为MMU41636 的序列设计一对PCR引物,要求产物长度为1000-1500bp,引物Tm值范围为40℃-60℃,引物GC%为40%-60%,请写出具体 PCR时,如果上下游引物Tm值相差较大该怎样设定反应程序?反应后有非特异性条带出现,只有一条,该怎样去除? 求助巢式PCR退火温度的设定我最近准备做巢式PCR,下游引物用oligo dT,上游用两个基因特异性引物,但上游的两个引物和下游的oligo dT相比,Tm值差了将近10度,这样退火温度怎么设定呢? 引物的TM值如何计算 如何计算引物的Tm值? 如何计算引物的Tm值? 同一模版DNA在进行PCR扩增时是不是需要不同的两种引物?为什么资料上说引物只要Tm值相似就行?